CÔNG NGHỆ TÁCH CHIẾT NUCLEIC ACID SỬ DỤNG HẠT TỪ

Với sự phát triển nhanh chóng của mảng sinh học phân tử, nhu cầu tìm ra phương pháp tách chiết các phân tử acid nucleic số lượng lớn, nhanh hơn, đơn giản hơn ngày càng cấp thiết, mà các phương pháp hóa học truyền thống phenol-cloroform không đáp ứng được. Trong lĩnh vực phân tách và tinh sạch sinh học, kỹ thuật sử dụng chất mang từ tính đang trở thành công cụ ngày càng phổ biến để tách các phân tử sinh học như acid nucleic, protein.

Những năm gần đây, hạt nano từ tính, cụ thể là hạt nano sắt từ được ứng dụng rộng rãi trong một số lĩnh vực của y sinh học, sinh học phân tử nhờ tính chất ưu việt của vật liệu nano từ. Với mức kích thước nano, các hạt nano từ tính giúp cho chúng ta có thể thao tác ở qui mô phân tử và tế bào. So với vật liệu từ dạng khối, hạt nano sắt từ Fe₃O₄ có lực kháng từ rất nhỏ (gần bằng không) và từ độ bão hòa cao hơn nên chúng rất nhạy với sự thay đổi của từ trường bên ngoài.

Cấu tạo và tính chất của hạt từ 

Hạt từ được cấu tạo bởi 2 phần, bao gồm lõi từ (oxit sắt, ferit kẽm, vàng MNPs,…) và chất phủ bề mặt (silica, carboxyl,…). Với những hạt từ có lõi từ là oxit sắt sẽ có tính chất siêu thuận từ, hạt siêu thuật từ này chỉ biểu hiện từ tính khi có từ trường ở bên ngoài và các moment từ sẽ quay theo làm cho cảm ứng từ tổng cộng trong chất tăng lên. Tính chất này phụ thuộc vào kích thước nhỏ của các hạt từ và cho phép những gì liên kết với hạt từ được phân tách dễ dàng ở dạng huyền phù. Có nhiều loại hạt từ khác nhau về chất hóa học và lớp phủ bề mặt để phù hợp với từng mục đích như phân lập hoặc tinh sạch nucleic acid, protein hay các phân tử sinh học khác một cách hiệu quả nhất.

Quy trình kỹ thuật tách chiết hạt từ

Đối với kỹ thuật tách chiết sử dụng hạt từ sẽ cần hệ thống tách chiết từ tự động và trải qua 3 bước chính: ly giải, rửa và rửa giải thu nhận sản phẩm.

Bước 1: Ly giải 

Ở bước ly giải, mẫu sẽ được xử lý bằng dung dịch ly giải. Dung dịch ly giải có chứa các chất ly giải tế bào như Triton x100 hay SDS tween 20 và nồng độ cao muối chaotropic như Guanidine HCL, Ure, Guanidine Thiocyanate,… đồng thời có thể kết hợp với Proteinase K để tăng hiệu quả phá vỡ tế bào. Quá trình xử lý với dung dịch ly giải sẽ làm mất sự ổn định của liên kết hydro, lực Van der Waals, tương tác kỵ nước,… Đồng thời phá vỡ liên kết của nucleic acid với nước giúp cho nucleic acid dễ dàng gắn lên bề mặt hạt từ.

Bước 2: Rửa 

Sau khi trải qua bước ly giải, nucleic acid sẽ được gắn lên bề mặt hạt từ nhờ từ trường tạo ra bởi thanh từ, bỏ lại một phần những tạp chất không có khả năng gắn với hạt từ này. Các nucleic acid sau khi được gắn lên hạt từ sẽ được rửa để loại bỏ hết các protein, polysaccharide, muối và các tạp chất khác. Đa số sẽ tách riêng thành hai bước rửa, bước rửa đầu tiên sẽ sử dụng dung dịch có nồng độ muối chaotropic cao nhằm loại bỏ protein, sắc tố và các tạp chất khác. Bước rửa thứ hai sẽ sử dụng dung dịch có nồng độ ethanol cao để loại bỏ muối tồn đọng trong mẫu cũng như muối từ bước rửa đầu tiên. Việc loại bỏ muối này rất quan trọng, nếu nồng độ muối cao sẽ ảnh hưởng đến quá trình rửa giải và dẫn đến hiệu suất thu hồi kém.

Bước 3: Rửa giải thu nhận sản phẩm

Nucleic acid sau khi trải qua bước rửa sẽ được làm khô để loại bỏ hết toàn bộ ethanol nhằm ngăn chặn ảnh hưởng của ethanol lên quá trình rửa giải cũng như các thí nghiệm sau tách chiết. Nucleic acid được loại bỏ hết ethanol sẽ được chuyển vào dung dịch rửa giải. Dung dịch rửa giải có thể chứa đệm Tris, sẽ làm cho nucleic acid bị hydrat hóa và nhanh chóng giải phòng khỏi màng silica. Sau khi rửa giải hoàn tất, các nucleic acid sẽ được tách hoàn toàn khỏi hạt từ và thu được sản phẩm có chất lượng cao.

Phương pháp tách chiết nucleic acid bằng hạt từ đem lại rất nhiều ưu thế so với các phương pháp tách chiết truyền thống như độ tinh sạch cao, thời gian thưc hiện ngắn với số lượng mẫu lớn, giảm thiểu thao tác, tiết kiệm nhân lực và bảo vệ sức khỏe người thao tác nhờ hạn chế việc tiếp xúc với các chất độc hại,… Sản phẩm sau tách chiết có thể sử dụng cho đa dạng các phương pháp chẩn đoán, điều trị và xét nghiệm miễn dịch khác nhau.

Công ty Cổ phần Công nghệ TBR hiện đang phân phối các sản phẩm kit tách chiết bằng hạt từ của hãng ABT, với 5 dòng sản phẩm:

Các bộ kit tách chiết từ của Công ty Giải pháp Y sinh ABT được sản xuất dựa trên công nghệ ly trích tự động bằng hạt từ đạt chuẩn chất lượng ISO 9001 và 13485, cung cấp giải pháp tách chiết hiệu quả và linh hoạt từ nhiều nguồn mẫu đa dạng, DNA/RNA thu nhận có độ tinh sạch cao phù hợp cho nhiều xét nghiệm sinh học phân tử. Ngoài ra, các bộ kit cũng được thiết kế phù hợp với nhiều hệ thống tách chiết phổ biến trên thị trường từ các nhà sản xuất như Bioer, TanBead, Thermal Fisher, Biotecon Diagnostics, Zinexts, Intron Biotechnology, Zybio. Đồng thời, sản phẩm được đóng gói cả ở dạng chưa chia và chia sẵn tiện lợi, dễ dàng lựa chọn để tối ưu thao tác cũng như thời gian.

Chi tiết sản phẩm kit tách chiết hạt từ mời quý khách hàng tham khảo chi tiết tại đây.

Tư vấn miễn phí chi tiết tham khảo thêm 

 Công ty cổ phần công nghệ TBR:

+84 28 6676 7762

sales@tbr.vn

http://www.tbr.vn

Số 51 đường 26 - Bình trị Đông B- Bình Tân- Thành phố Hồ Chí Minh