PCR MASTER MIX DẠNG ĐÔNG KHÔ?
Thông thường, những phòng thí nghiệm Sinh học phân tử khi thực hiện PCR hoặc Real-time PCR hầu như đều sử dụng PCR Mix dạng lỏng được pha sẵn cho phản ứng. Ngoại trừ những phòng thí nghiệm chuyên nghiên cứu hoặc đào tạo thì chúng ta ít khi thấy PCR Mix dạng đông khô được xuất hiện.
.jpg)
Khi phương pháp PCR ra đời năm 1985, Master Mix đã được phát triển cùng kỹ thuật này. Kể từ đó Master Mix vẫn luôn được sử dụng ở duy nhất dạng thể lỏng cho tới năm 1998. Vào khoảng thời gian này, khi công nghệ đông khô được nghiên cứu thành công thì Master Mix cũng đã được ứng dụng sản xuất dựa trên công nghệ này.
Vậy tại sao Master Mix lại liên tục được phát triển để mà không dừng lại ở dạng lỏng truyền thống?
Như chúng ta đã biết, Master Mix là một hỗn hợp gồm rất nhiều thành phần thực hiện phản ứng PCR. Và để bảo quản tối ưu cho tất cả những thành phần này, ta thường thấy Master Mix dạng lỏng sẽ được lưu trữ ở -20ºC. Nhưng trong đó, Enzyme Taq Polymerase là một thành phần khá nhạy cảm với những thay đổi của môi trường bảo quản. Bản chất là một protein, nếu bảo quản Taq Polymerase trong môi trường đóng băng sau đó rã đông thì cấu trúc bậc 3 của enzyme này sẽ bị đứt gãy. Bởi vì vấn đề đó, trong Master Mix người ta sẽ bổ sung thêm một thành phần đó là Glycerol. Là một rượu đa chức có 3 nhóm -OH liên kết với gốc C3H5, glycerol có khả năng tạo liên kết hydro đối với các phân tử nước, làm giảm đi số liên kết hydro giữa các phân tử nước với nhau. Và chính điều đó giúp cho grlycerol ngăn chặn việc hình thành mạng tinh thể băng trong dung dịch, vậy nên bổ sung glycerol vào dung dịch giúp cho việc đảm bảo môi trường bên trong vẫn lạnh nhưng dung dịch không bị đông hoàn toàn.
Luôn luôn phụ thuộc vào nhiệt độ âm khiến cho việc bảo quản Master Mix dạng lỏng sẽ có một vài hạn chế. Đầu tiên, một số khu vực có nguồn điện không ổn định sẽ gây ra sự gián đoạn trong quy trình bảo quản do việc duy trì nhiệt độ âm không được liên tục. Điều này tương tự như việc rã đông và cấp đông quá nhiều lần, sẽ ảnh hưởng đến chất lượng của Master Mix. Thứ hai, quá trình vận chuyển Master Mix cũng phải luôn luôn giữ sản phẩm ở nhiệt độ âm. Nếu vận chuyển quãng đường quá dài sẽ tốn rất nhiều chi phí của nhà cung cấp cũng như khách hàng. Ngoài ra, khi vận chuyển các sản phẩm dạng lỏng cũng có thể xảy ra trường hợp tràn đổ dung dịch. Hoặc đối với quá trình sử dụng, nếu như người sử dụng để quên Master Mix ở nhiệt độ phòng quá lâu thì rất dễ dàng ảnh hưởng đến chất lượng của sản phẩm.
Từ đó nhiều nỗ lực đã đươc thực hiện để khắc phục những nhược điểm của việc bảo quản sản Master Mix dạng lỏng, và đông khô được xem như một phương pháp thay thế tiềm năng. Về mặt hoạt động, đông khô là một phương pháp có thể kiểm soát sự khử nước các mẫu không bền bằng cách hút ẩm chân không. Mục đích chính là loại bỏ nước khỏi tế bào đến khi không còn hỗ trợ sự phát triển sinh học hoặc phản ứng hóa học. Trong quá trình đông khô, nước bị loại bỏ cũng như không giữ liên kết giữa các phân tử sinh học, từ đó ảnh hưởng đến cấu trúc và chức năng do chúng phụ thuộc vào sự hiện diện của nước lỏng và các tương tác với chúng, tuy nhiên DNA và các protein có khả năng chống khô tương đối và thường có thể được đông khô mà không có tác dụng phụ.
Một số nghiên cứu đã cho thấy rằng, khi sử dụng Master Mix đông khô được bảo quản ở 20ºC thì sau 1 năm, sản phẩm vẫn cho kết quả PCR ổn định. Và nếu bảo quản ở nhiệt độ cao hơn (37ºC) thì sau 3 tháng vẫn cho kết quả gần như tương đương. Tuy sẽ mất thêm một khoảng thời gian ngắn để pha loãng trước khi sử dụng, nhưng những ưu điểm của Master Mix dạng đông khô đem lại là không thể phủ nhận.
Là nhà phân phối độc quyền của Bioline (Medirian Bioscience), TBR cung cấp cho các phòng thí nghiệm sản phẩm PCR Master Mix dạng đông khô SensiFAST™ Lyo-Ready No-ROX Mix do Bioline sản xuất.
Là hỗn hợp Master Mix cho Real-time PCR, SensiFAST™ Lyo-Ready No-ROX Mix đảm bảo cho ra kết quả đáng tin cậy trong điều kiện chu kỳ nhiệt ngắn hay với cả trong trường hợp chênh lệch lớn về số lượng bản sao đích giữa các tác nhân khi thực hiện Multiplex qPCR.
